β-内酰胺酶检测试剂盒

β-内酰胺酶检测试剂盒                

β-内酰胺酶检测试剂盒适用范围：

本试剂盒适用于鲜奶及奶制品中对舒巴坦敏感的β-内酰胺酶类物质的检验，可用于奶站，食品工厂及食品安全检测机构实验室初筛使用。

检验原理：

该方法采用对青霉素类药物敏感的标准菌株，利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性，并加入青霉素作为对照，通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所检测结果的颜色来间接测定样品中是否含有β-内酰胺酶类物质。

试剂盒组成：

酶标板（96孔） 1板      塑料封口膜 1张

青霉素标准品 1支        舒巴坦固体 1支

说明书 1份

自备材料：蒸馏水、加样器、恒温培养箱。

溶液配制：

青霉素标准液：称取5.8mg青霉素标准品，用蒸馏水稀释至100ml。再取50ul用蒸馏水稀释至100ml。青霉素浓度为0.029ug/ml。

舒巴坦标准液：称取4.4mg舒巴坦固体（90.8%），用蒸馏水稀释至100ml。舒巴坦浓度为40ug/ ml。

样品处理及保存方法

• 牛奶样品取样可直接测定，样品要新鲜，４℃储存不能超过48小时。
• 如样品为奶粉，则将奶粉按1:10的比例稀释。
• 如样品为酸性奶制品，应调节pH值至6-7。

检测步骤：

1．预先将培养箱打开，预热至65℃。

2．根据检测需要取出足量微孔板条,然后将不用的微孔板条重新封口保存在2-8℃。

3．用加样器吸取待测液，加入微孔中，每个样加2个孔，每孔50 ul，其中1个孔（检测孔）再加入5 ul青霉素标准液；另一孔（验证孔）先加5 ul舒巴坦钠标准液，再加入5 ul青霉素标准液。

4．取一片封口膜，将实验微孔封严，室温放置30分钟后放入培养箱，65℃培养3个小时。

5．必要时可做阳性对照：

取β—内酰胺酶（2.4×10⁶U/ml）100ul，用蒸馏水稀释至100ml，再取170ul用阴性奶定容至100ml，作为阳性奶对照。其他检测步骤同上。

结果判定：

1．如样品孔均显紫色，则可确认该样品中未添加β-内酰胺酶类物质。

2．如果检测孔显黄色，验证孔显紫色，则可确认该样品中添加了β-内酰胺酶类物质。

3．如果样品孔均显黄色，则可能样品中β-内酰胺酶含量>20U/ ml，应进行稀释后再检测。

检测限：β—内酰胺酶：4U/ml

注意事项：

1．一个吸头对应吸取一个样品,防止交叉污染。

2．培养时注意观察封口胶是否封严，为避免微孔中培养基被蒸干，可将酶标板装入自封袋培养。

3．时时检查培养温度，这对结果至关重要，小心控制温度使其保持在65±2℃持续恒定。

4．每次检测时需设置2个孔，各加入60ul蒸馏水做空白实验。空白实验孔应显黄色，否则结果视为无效。

5．对于颜色处于紫色和黄色之间的样品，应怀疑为阳性样品。

6．使用前如果微孔板中的培养基颜色发生变化，请不要使用。

贮存条件与有效期：

试剂盒应在2～8℃下避光保存，有效期为六个月。生产日期见酶标板。